ранняя диагностика пола ребенка
Как узнать пол ребёнка при беременности: УЗИ и другие методы
» data-image-caption=»» data-medium-file=»https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?fit=435%2C300&ssl=1?v=1572898681″ data-large-file=»https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?fit=797%2C550&ssl=1?v=1572898681″ />
Обычно будущим родителям не терпится узнать, кто родится – мальчик или девочка? Некоторые пытаются определить пол нетрадиционными методами, например, по дате овуляции и зачатия, но не всегда результат оказывается достоверным. Сегодня специалисты питерской клиники Диана расскажут, как узнать пол ребенка на УЗИ и другими методами.
Зачем нужно определять пол ребенка
Существует несколько причин, для чего будущие родители хотят определить пол малыша. Прежде всего, это интерес и любопытство, которые не дают дождаться рождения в неведении. Кроме этого, некоторые пары желают заранее подготовить комнату, купить вещи и выбрать имя, а некоторые родители мечтают именно о мальчике или девочке.
Как узнать пол ребенка
» data-image-caption=»» data-medium-file=»https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?fit=435%2C300&ssl=1?v=1572898681″ data-large-file=»https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?fit=797%2C550&ssl=1?v=1572898681″ loading=»lazy» src=»https://i1.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka-797×550.jpg?resize=790%2C545″ alt=»Как узнать пол ребенка» width=»790″ height=»545″ srcset=»https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?w=797&ssl=1 797w, https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?w=435&ssl=1 435w, https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?w=768&ssl=1 768w, https://i0.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/Kak-uznat-pol-rebenka.jpg?w=1009&ssl=1 1009w» sizes=»(max-width: 790px) 100vw, 790px» data-recalc-dims=»1″ />
Важность определения пола ребенка обусловлена и медицинскими показаниями. Когда речь идет о хромосомных патологиях, такая информация о половой принадлежности жизненно необходима.
Развитие плода и его половых признаков по срокам беременности
В первом триместре пол ребенка определить практически невозможно. Можно лишь сделать предположение о половой принадлежности плода.
На 8 неделе беременности размер плода составляет всего 12 мм. Он уже имеет небольшую выпуклость – половой бугорок, который не отличается у девочек и мальчиков до 11 недели, поэтому идентифицировать пол невозможно.
Длина эмбриона на 13 неделе составляет 64 мм. На этом сроке у мальчиков под воздействием тестостерона из полового бугорка начинает формироваться пенис, а из половых складочек – тело органа. Происходит усиленный рост губно-мошоночных бугорков, которые, срастаясь, превращаются в мошонку. К этому времени крайняя плоть уже сформирована полностью.
В организме девочки содержится незначительное количество тестостерона, поэтому внешне её половые органы после 8 недели практически не изменяется. Происходит формирование клитора из полового бугорка, малых половых губ из мочеполовых складок, а также больших половых губ из губно-мошоночных бугорков. Открытая мочеполовая борозда образует вход во влагалище. Локализация наружного отверстия мочеиспускательного канала определяется на 14 неделе беременности.
К 20 неделе половые органы обоих полов уже практически полностью сформированы и могут быть идентифицированы — иными словами на УЗИ уже можно увидеть, кто будет — мальчик или девочка.
Когда можно наиболее точно определить пол ребенка
Оптимальный срок для определения половой принадлежности малыша — второй или третий триместр. Начиная с 20 недели, специалист может наиболее точно определить результат по уже практически сформированным половым органам ребенка. На экране УЗИ – аппарата у мальчиков видна только мошонка, самого часто пениса не видно. А вот у девочек очень хорошо просматриваются большие половые губы.
Бывает так, что во время обследования ребенок недостаточно подвижен или разворачивается так, что половые органы достаточно проблематично рассмотреть даже на третьем плановом УЗИ. Иногда мальчик «скрывает» половой член, плотно сжав ножки, и может ошибочно «обозваться» девочкой. Или же, наоборот, девочку могут идентифицировать как мальчика, перепутав пуповину с пенисом. Поэтому для достоверности результата процедуру УЗИ повторяют.
Опытный профессиональный сонографист может определить пол ребенка и по другим показателям. Так, у мальчиков пуповина более толстая, гораздо больше амниотической жидкости, да и вес плода значительный. У девочек же все наоборот – тонкая и менее длинная пуповина, меньший вес и объем околоплодных вод.
пол ребенка на узи
» data-image-caption=»» data-medium-file=»https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1.jpg?fit=415%2C300&ssl=1?v=1572898680″ data-large-file=»https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1.jpg?fit=761%2C550&ssl=1?v=1572898680″ loading=»lazy» src=»https://i1.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1-761×550.jpg?resize=761%2C550″ alt=»пол ребенка на узи» width=»761″ height=»550″ srcset=»https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1.jpg?w=761&ssl=1 761w, https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1.jpg?w=415&ssl=1 415w, https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1.jpg?w=768&ssl=1 768w, https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2017/07/pol-rebenka-na-uzi-1.jpg?w=904&ssl=1 904w» sizes=»(max-width: 761px) 100vw, 761px» data-recalc-dims=»1″ />
Способы определения пола по УЗИ на ранних сроках
Общепризнанный способ определения половых признаков ребенка — УЗИ. Этот информативный, безболезненный и безопасный метод не имеет противопоказаний и позволяет определить пол малыша с точностью 80 – 99%. На достоверность результат будет влиять опыт врача, качество оборудования и срок беременности, на котором происходит обследование.
Пол ребенка закладывается еще в момент зачатия. Изменить его невозможно, как бы не внушали СМИ идею о генетической инженерии. Не стоит верить и «народным методам», которые опровергаются традиционной медициной, а некоторые и вовсе опасны (например, ежедневно пить сок чеснока).
Сделать предположение о половой принадлежности можно, начиная с 12 недели, но при условии высококачественной аппаратуры и опытного квалифицированного врача. В противном случае ответ может оказаться ошибочным.
Существует несколько косвенных признаков, по которым будущие родители могут узнать результат:
Пол ребенка: ошибки диагностики
Чем меньший срок, на котором проводится исследование, тем больше вероятность получения ошибочного ответа. Но даже на позднем сроке опытный профессионал не сможет на все 100% определить пол. Ошибки могут возникнуть по следующим причинам:
Мальчики могут «прятать» свои половые органы и внешне казаться девочками. Также пуповина или выставленный пальчик девочек могут быть оценены как пенис.
Определение пола ребенка методом 3D и 4D УЗИ
Трехмерное и четырехмерное УЗИ – наиболее достоверный способ определения пола ребенка с помощью ультразвука. Такой вид исследования позволяет рассмотреть отдельные части тела ребенка и даже на кого из родителей он похож. Изображение плода настолько реалистичное, что будущие родители даже без помощи врача могут получить ответ. При этом ошибка практически исключается.
Оптимальным сроком проведения 3D и 4D УЗИ является 25 – 30 недели, когда возможно получение наиболее достоверного результата. Мощность ультразвука такая же, как и при двухмерном УЗИ. Он абсолютно безопасен и не вредит ни ребенку, ни будущей матери.
Кроме этого, отличается от 2D УЗИ большими возможностями, поскольку дает дополнительную информацию, способствующую успешной и своевременной диагностике многих отклонений.
Способы определения пола ребенка без УЗИ
Некоторые будущие родители пользуются другими способами определения половой принадлежности их малыша: кто-то «бабушкиными» методами, кто-то разными медицинскими способами. Стоит помнить, что многие из них являются «сомнительными» и недостоверными, а некоторые даже опасными.
Инвазивные методы
Неинвазивные расчетные методы пола ребенка
Таким образом, ультразвуковое исследование – наиболее достоверный, а, главное, безопасный метод определения пола будущего ребенка. Да, вероятность ошибки существует, но это не повод из-за любопытства подвергать опасности себя и своего ребенка, используя инвазивные расчетные методы.
Неинвазиные способы достаточно сомнительны и научно не подтверждены, поэтому полагаться на них или нет – индивидуальный выбор каждых будущих родителей. Врачи не рекомендуют доверять им, считая их «бабушкиными» поверьями и не более.
Где определить пол ребенка в СПБ
Если Вы хотите узнать, кто у Вас родится — мальчик или девочка, приглашаем Вас в клинику Диана в Санкт-Петербурге. У нас установлен новый УЗ-аппарат с доплером и функциями 3-D и 4-D.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter
Определение пола ребенка
Зачем заранее узнавать пол ребенка, научные и народные методы определения пола, можно ли запланировать пол малыша.
Зачем нужно знать пол ребенка?
Будущую маму, только узнавшую о беременности, волнует множество вопросов. Родится ли малыш здоровым? На кого он будет похож? И наконец, кого мы ждем: мальчика или девочку? С точностью около 90% ответ на последний вопрос тревожным родителям дадут во время УЗИ второго триместра, на сроке с 18-й по 21-ю неделю. Но как же трудно ждать эту волнующую новость! Кроме того, бывают ситуации, когда пол будущего малыша нужно узнать как можно раньше.
Генетические заболевания
Существуют некоторые болезни, которые наследуются строго по мужской или женской линии: так, гемофилия передается от матери к сыну. В таких случаях ранняя диагностика жизненно необходима.
Практические соображения
Для многих родителей критично знать заранее, какое приданое готовить для будущего малыша. Например, если дети будут разнополыми, многие вещи придется докупить.
Семейные решения
Порой родители по тем или иным причинам хотят воспитывать только мальчика или девочку — в таком случае пол лучше узнать на раннем сроке, чтобы принять решение о сохранении беременности.
Психологический настрой
Папа всю жизнь мечтал научить сына играть в футбол, а мама уже купила для будущей дочки целую коллекцию кукол. Увы, после скринингового УЗИ один из них будет разочарован. Для того чтобы известие о поле ребенка не было шокирующим, стоит получить его пораньше.
Научные способы определения пола
Раньше УЗИ было единственным способом определить пол будущего малыша, но теперь на службе у медицины несколько методик, которые помогут беременной узнать, кого она ждет — сына или дочь.
Биопсия ворсин хориона
С помощью этой процедуры можно определить пол малыша уже на 8 – 10-й неделе. Материал для нее берут, прокалывая околоплодный пузырь через живот мамы или шейку матки. Звучит страшно, но специалисты выполняют процедуру под контролем аппарата УЗИ, определяя самое безопасное место для прокола. Через иглу вводят специальный зонд, с помощью которого забирают материал, не касаясь плода.
Несмотря на то, что биопсию проводят под местной анестезией, она все равно доставляет дискомфорт. А главное, ее последствия могут быть фатальными — от серьезного воспалительного процесса до выкидыша. Поэтому к биопсии хориона обычно прибегают в крайних случаях, если речь идет о риске генетических заболеваний.
Анализ мочи
Довольно простой и безопасный способ — определение пола по анализу мочи. Он схож с обычным тестом на беременность, отличие только в том, что исследуется не количество ХГЧ (гормона беременности), а его свойства. В утреннюю мочу добавляют специальный реагент, который окрашивает анализ в зеленый цвет, если в нем есть мужские гормоны, и в оранжевый, если их нет. Точность такого анализа — 90%, а проводится он с 8-й недели беременности. Этот тест можно купить в аптеке или через интернет, но его цена довольно высока.
Анализ крови
Один из самых точных методов определения пола на ранних сроках — анализ фетальной ДНК в крови женщины. Его можно сделать уже на 7-й неделе беременности, при этом точность результата составляет 95%, а с каждой последующей неделей — возрастает. Сама процедура проста: будущая мама на голодный желудок сдает кровь из вены, а затем в анализе выделяют ДНК малыша. Полученный образец ДНК специальными маркерами проверяют на наличие хромосомы Y: если она есть, значит будущий ребенок мальчик. Этот тест можно сделать в специализированных клиниках.
Экспертное УЗИ
Несмотря на то, что традиционно пол ребенка по УЗИ определяют на сроке от 18 – 20 недель, некоторые специалисты — их имена обычно передают из уст в уста — могут сделать это уже в 11 – 12 недель, когда гениталии малыша еще не сформированы — есть только половой бугорок, который впоследствии разовьется до мужского или женского органа. По внешнему виду и углу наклона бугорка опытный профессионал, работающий на современной аппаратуре, может с точностью около 80 – 90% определить пол ребенка.
Альтернативные методы
Несмотря на разнообразие официальных анализов для определения пола, уже с первых недель беременности будущие мамы активно пользуются околонаучными методами, пытаясь угадать, кого они ждут: сына или дочь. Конечно, о надежности этих способов говорить не приходится, но тестировать их очень увлекательно.
Сравнение групп крови
Этот метод требует минимум времени и затрат: достаточно узнать группу крови каждого из родителей и свериться с таблицей.
Обновление крови
Еще один способ учитывает цикличность обновления крови в человеческом организме. У женщины этот процесс занимает 3 года, у мужчины — 4. Необходимо разделить возраст мамы и папы соответственно на эти цифры и сравнить остатки: у кого он меньше (а значит, кровь «свежее»), тот и «отвечает» за пол будущего малыша.
Календарный метод
Если до зачатия вы вели календарь овуляции, то сможете воспользоваться этим способом. Дело в том, что сперматозоиды c женской X-хромосомой более живучие: после полового акта они могут оставаться в организме будущей мамы несколько суток, «дожидаясь» овуляции. А вот сперматозоиды с мужской Y-хромосомой быстро погибают и способны оплодотворить яйцеклетку только во время овуляции. Это значит, что, если зачатие произошло в начале или конце цикла, скорее всего, родится девочка, а если в середине — мальчик.
Многим беременным таблицы и календари кажутся скучными — куда интереснее попробовать угадать пол будущего малыша, пользуясь многовековыми народными приметами. Эти гадания не имеют под собой никакой научной основы, но очень популярны у будущих мам и, конечно, их окружения.
Вот некоторые из них:
Важно помнить, что надежность этих примет ничем не доказана, и пользоваться ими можно лишь для развлечения. И конечно, не позволяйте злоупотреблять всевозможными гаданиями родственникам, пытающимся «предсказать» пол вашего малыша: ничего, кроме лишнего стресса, это вам не принесет.
Как запланировать пол малыша
Родители, мечтающие только о сыне или именно о дочке, могут попробовать повлиять на пол будущего ребенка до зачатия, пользуясь научными или народными методами.
Научное планирование пола
Самый популярный способ — календарный. Как мы уже говорили, сперматозоиды с женской X-хромосомой более живучи, чем с мужской Y-хромосомой. Для того чтобы зачать мальчика, стоит воздерживаться от отношений с мужем в течение всего месяца и заняться любовью строго в день овуляции. А для зачатия девочки, наоборот, необходимо полностью ограничить половую жизнь в середине цикла.
Лабораторный способ
Родители, всерьез озабоченные полом будущего малыша, могут воспользоваться ультрасовременной — и очень дорогостоящей! — методикой под названием MicroSort. Вот в чем ее суть: сперматозоиды отбирают и сортируют по половому признаку, а затем избранными (мужскими или женскими соответственно) оплодотворяют яйцеклетку. Как правило, этим методом пользуются пары, в которых есть риск генетических заболеваний.
Экстракорпоральное оплодотворение
Для процедуры ЭКО у будущей мамы забирают около пяти яйцеклеток и оплодотворяют их в лаборатории. Соответственно, получается несколько эмбрионов разного пола, и при желании будущие родители могут заранее выбрать мальчика или девочку. Впрочем, эта процедура считается не вполне этичной и во многих центрах репродуктологии запрещена.
Народные методы
Для планирования пола малыша, как и для его определения, существует множество околонаучных методов. Воспринимать их всерьез не стоит, но ознакомиться — можно.
Нужно помнить, что и научные, и народные методы определения и планирования пола малыша имеют погрешность. Ни один из них не дает стопроцентного результата, но, возможно, этого и не нужно. Малыш в любом случае будет уникальным и достойным вашей безграничной любви, вне зависимости от его пола.
Пренатальный скрининг: уточняющие тесты
Поделиться:
— Там все девочки плакали, я одна была уверена, что все будет в порядке! — рассказывает мне беременная, гордо демонстрируя бумажку с результатом 46XY. У нас родится отличный здоровый мальчик без хромосомной патологии.
Да, вероятность того, что ребенок совершенно здоров, очень высока. Но если плод все-таки имеет генетические отклонения, об этом необходимо знать заранее. Консультирование в таких случаях проводят специалисты по медицинской генетике, которые могут подробно рассказать о результатах уточняющего тестирования и помочь родителям принять решение о сохранении или прерывании беременности.
По сути, уточняющих тестов всего два — инвазивный и неинвазивный. Инвазивный тест — это вмешательство в окружающий плода мир для получения клеточного материала. Неинвазивный — исследование, которое проводится по крови матери. Безусловно, сдать кровь из вены после 10-й недели беременности — совсем не страшно, но очень дорого и не оплачивается фондом ОМС. Обе методики имеют свои ограничения, поэтому стоит рассмотреть их подробнее.
Инвазивные тесты
Инвазивные тесты выполняются высококвалифицированными специалистами. Задача тестов — получить клетки плода, чтобы изучить его хромосомный набор. В сроке 10–13 недель проводится биопсия ворсин хориона. Через шейку вводится специальный инструмент, позволяющий отщипнуть небольшие фрагменты плаценты.
Если время для биопсии хориона упущено, в сроке 15–20 недель выполняют амниоцентез — под контролем УЗИ тонкой иглой выполняют прокол и собирают небольшое количество околоплодных вод.
Обе процедуры имеют свои риски и 1–2%-ную вероятность выкидыша. Именно поэтому инвазивные тесты рекомендованы только в тех случаях, когда вероятность рождения ребенка с хромосомным заболеванием выше, чем 1–2 %.
Клетки, полученные при инвазивных процедурах, могут исследовать разными способами:
НИПТ — неинвазивное пренатальное тестирование
Это совершенно новый метод, который постепенно входит в клиническую практику с 2011 года. Начиная с 9–10-й недели беременности выделяют плацентарные клетки (трофобласты) в крови матери и исследуют их ДНК. Этого оказалось достаточно, чтобы в очень раннем сроке беременности (до стандартного первого скрининга) с высокой точностью диагностировать хромосомную патологию плода.
НИПТ — достаточно дорогое исследование. Высокоточное определение пола ребенка — совсем небольшой бесплатный бонус метода. Конечно, чем больше параметров предстоит изучить, тем дороже анализ. Стандартная панель НИПТ с точностью 99 % позволяет исключить синдром Дауна, Эдвардса, Патау и аномалии половых хромосом (это большая группа заболеваний, когда вместо двух половых половых хромосом находят одну, три и даже четыре).
Самый дорогой вариант — расширенное исследование с микроделециями (маленькими поломками хромосом), позволяющее исключить/подтвердить 22q11.2 делецию (синдром Ди Джорджи), 1p36 делецию (синдром Ангельмана, синдром Прадера – Вилли, синдром кошачьего крика).
Кому стоит делать НИПТ
В интернете можно найти огромное количество показаний для проведения этого теста. Это и возраст матери 35+, и привычное невынашивание беременности, и случаи рождения таких деток в семье. На самом деле единственным показанием для проведения НИПТ является желание женщины.
FIGO в 2015 году предложила использовать следующий алгоритм диагностики:
Гораздо важнее понимать, в каких случаях использование НИПТ невозможно или нецелесообразно:
В этом случае очень сложно разделить, где чья ДНК (матери, одного, или второго, или третьего плода, донора крови либо тканей), поэтому результаты получаются неинформативными.
Неинвазивные тесты имеют различные фирменные названия (Panorama, Prenetix, Harmony, Veracity) и несколько отличаются по технике выполнения. Каждая компания тщательно лелеет свою «придумку» и считает, что их НИПТ гораздо лучше других.
Что надо учитывать?
Если первый скрининг выявил высокий риск хромосомных аномалий, важно понимать, что риск — это не диагноз. Но если женщина категорически против рождения ребенка с хромосомной аномалией (важно понимать, что на сегодняшнем этапе развития медицины такие болезни неизлечимы), проведение инвазивного теста обязательно. Прервать беременность после 12-й недели можно только по решению врачебной комиссии с серьезными аргументами на руках.
Если женщина принимает решение вынашивать беременность в любом случае, она вправе отказаться от дальнейших диагностических процедур. Вместе с тем более определенная информация поможет родителям подготовиться к рождению «синдромного» ребенка: найти группы поддержки в соцсетях, поговорить с родителями, воспитывающими таких детей, заранее составить план медицинского обслуживания.
Что касается выбора между инвазивными методиками и НИПТ, то важно понимать, что материалы инвазивного теста можно исследовать разными способами — и обнаруживать всевозможные заболевания. А методика НИПТ отвечает только на те вопросы, которые сформулированы врачом. Именно поэтому «последнее слово» все еще остается за инвазивной диагностикой, хотя ложноположительные результаты встречаются у любого вида тестирования.
Также родители имеют право полностью отказаться от проведения скрининга или любых уточняющих тестов. В этом случае достаточно подписать информированный добровольный отказ от вмешательства. Однако если женщина передумает и захочет все-таки выполнить тестирование, некоторые из них (те, которые проводятся строго в определенные сроки беременности) сделать уже не получится.
Ранняя диагностика пола ребенка
Основным методом диагностики пола плода в медицинской практике на данный момент является УЗИ диагностика, самый ранний срок определения пола по УЗИ – 11–12 недель, но точным данный метод может считаться только на 18 неделе. В то же время определение пола плода необходимо не только для удовлетворения любопытства родителей, но также и для определения наличия трисомий, моносомий и прочих аберраций числа половых хромосом, имеющих довольно высокую частоту в популяции: Синдром Шерешевского – Тёрнера 1:1500; Синдром Клайнфельтера 1:500; Синдром де ля Шапеля 1:20000 XYY-синдром 1:1000, ХХХ – 1:1000 и другие [2, 6, 14, 15].
Существующие методы инвазивной пренатальной диагностики позволяют определить пол плода на ранних стадиях гестации, но из-за недостатков: угроза прерывания беременности, развитие кровотечения и т.д., не целесообразно применять их без серьезных медицинских показаний [1, 10]. Поэтому использование методов неинвазивной пренатальной диагностики, для которых исследуемым материалом является кровь матери, может быть как ранней альтернативой УЗИ, так и безопасной альтернативой существующим инвазивным методам [3, 4].
Один из перспективных неинвазивных методов: захват трофобластов, циркулирующих в крови матери – генетический материал трофобластов при должном уровне обогащения и захвата может служить источником фетальной ДНК для пренатального генетического анализа начиная с 9-й недели гестации [9,11]. В то же время низкое содержание трофобластов в материнском кровотоке делает необходимым совершенствование протоколов молекулярной диагностики амплифицированного генетического материала, полученного из единичной клетки [12, 13].
Для определения пола можно использовать STR анализ, для этого библиотека амплифицированных фрагментов должна репрезентативно отражать геном единичной клетки и давать воспроизводимые результаты в ходе фрагментного STR анализа микросателлитной ДНК [5, 7, 8].
Цель исследования заключалась в ранней диагностике пола плода и аберраций числа половых хромосом, на основе STR анализа локусов половых хромосом на основе ДНК трофобластов, циркулирующих в кровотоке матери.
Материал и методы
В работе были исследованы 15 образцов периферической крови, полученные от женщин с одноплодной беременностью в сроках гестации 8–13 недель. Средний возраст обследованных женщин составил 28 лет (от 23 до 37 лет). У 8 (53,3 %) настоящая беременность была первой, у остальных – повторные.
Периферическую гепаринизированную венозную кровь беременных разбавляли фосфатно-солевым буфером и выделяли мононуклеары центрифугированием на градиенте Histopaque-1077 (плотность 1.077 г/мл). Полученный образец мононуклеарных клеток (
2×107 клеток в 800 мкл) подвергали негативной иммуномагнитной сепарации по маркерам зрелых линейно дифференцированных клеток (набор BD Human Lineage Cell Depletion Set). Клетки окрашивали антителами против HLA-G, Trop-2, и CD45, ядра окрашивали Hoechst 33342. Сортировку трофобластов выполняли на BD FACS AriaIII (BD Biosciences, США). Полногеномную амплификацию ДНК отсортированных клеток проводили с набором PicoPLEX™ WGA Kit (Rubicon Genomics, США) на амплификаторе С-1000 (Bio-Rad Laboratories, Inc., США) с электрофоретическим контролем на Agilent 2200 TapeStation (Agilent Technologies, США). Амплифицированную ДНК использовали для количественной флуоресцентной ПЦР с реагентами Aneufast Multiplex QF-PCR Kit (Genomed, United Kingdom), содержащими STR маркеры к микросателлитной ДНК половых хромосом. Фрагментный анализ продуктов количественной флуоресцентной ПЦР выполняли на генетическом анализаторе ABI PRISM ABI ABI 3500xL (Applied Biosystems, США) с размерным стандартом GeneScan™ 600 LIZ® Size Standard v2.0 и программным обеспечением GeneMapper® Software v5.0.
Результаты
Центрифугирование в градиенте плотности с последующей магнитной сепарацией позволило получить взвесь клеток, максимально обогащенную трофобластами. Средняя концентрация выделенных клеток после негативной сепарации составила
4,72×105 клеток/мл, степень истощения превышала 90 % (93,1±2,14 %).
Негативную фракцию клеток подвергали специфическому иммуно-окрашиванию для выявления популяции трофобластов. Внутри гейта живых ядросодержащих клеток, негативных по панлейкоцитарному маркеру (CD45), выделяли двойной позитивный гейт HLA-G+Trop-2+, который использовали для дальнейшей сортировки (рис. 1).
Рис. 1. Выделение гейта сортировки трофобластов (Trop-2 + HLA-G + ) среди популяции клеток негативных по CD45
Число клеток-кандидатов, удовлетворяющих критериям сортировки CD45–HLA-G+Trop-2+, составило 34,4±10,3 клеток. Далее отсортированные в пробирки единичные клетки-кандидаты подвергали полногеномной амплификации. Электрофоретический контроль во всех образцах был положительным со средней концентрацией ДНК после очистки 56,8±10,1 нг/мкл.
На основе полногеномной амплификации получали библиотеку амплифицированных фрагментов ДНК единичных клеток для последующей мультиплексной количественной флуоресцентной ПЦР с использованием флуоресцентно-меченных праймеров, специфичных к индивидуальным STR последовательностям, с последующим разделением фрагментов капиллярным электрофорезом для сравнения числа пиков и их высоты для каждого STR маркера.
Наибольшая плотность длин фрагментов ДНК, полученных в ходе полногеномной амплификации, приходилась на диапазон 400–700 п.н., в связи с этим для определения пола были отобраны наиболее короткие STR маркеры (длиной менее 300 п.н.) для половых хромосом (табл. 1).
STR маркеры, использованные для определения полиморфизмов гоноосом (указаны максимальные диапазоны длин аллелей)